G1
¿Cuál es el material genético más estable?
El DNA
¿En qué geles puede realizarse la electroforesis de ADN?
Agarosa o de poliacrilamida.
¿Qué son las endonucleasas y qué cortan?
Tipo de nucleasas que cortan los enlaces fosfodiéster internos de DNA lineal y circular
En electroforesis de DNA el glicerol aporta:
Densidad a la muestra y facilitar su aplicación a los pocillos.
¿Qué información obtenemos de un gel de electroforesis?
Se obtienen los pesos del material genético y conocer si el mismo está degradado.
¿Qué son las nucleasas? ¿Qué tipos existen?
Enzimas que cortan el DNA o RNA. Exonucleasas y endonucleasas.
Las endonucleasas del tipo I cortan:
En sitios cercanos al de reconocimiento (al azar)
En electroforesis de DNA el azul de bromofenol (u otro colorante) sirve como:
Marcador del frente de avance de la electroforesis. Su color es una ayuda visual durante la carga de muestra en los pocillos.
Separados físicamente del ADN cromosómico y se réplica de manera independiente.
Plásmidos
¿Qué son las exonucleasas y qué cortan?
Tipo de nucleasas que cortan nucleotidos en los extremos del DNA o RNA lineal.
Las endonucleasas del tipo II cortan:
Justo en el sitio de reconocimiento (en repetidas ocasiones)
¿Qué es SDS y para qué sirve?
Detergente iónico utilizado para desnaturalizar proteínas en hibridación, purificación de ácidos nucleicos y sistemas de buffer de electroforesis.
Se determina mediante los métodos de absorción UV por espectrofotometría
Cuantificación de ácidos nucleicos
Las enzimas de restricción pueden reconocer:
Una secuencia de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y cortar en ese punto en concreto, llamado sitio o diana de restricción, o en un sitio no muy lejano a este.
En las endonucleasas tipo II los blunts ends (Romo) cortan:
Simétricamente, en sitios opuestos en ambas cadenas
Menciona 3 fluoróforos vistos en laboratorio.
Sybr Green, Sybr Gold y Carolina BLU (Sybr Blue)
Región contenida dentro de las secuencias de los genes que codifican para los marcadores, que contienen múltiples sitios de restricción.
Polylinker
El ___ tiene una menor capacidad de amortiguación que el ___, y tiene una mayor capacidad de resolución que el ___ para tamaños grandes de ADN.
TAE / TBE / TBE
En las endonucleasas tipo II los sticky ends (Pegajoso) cortan:
Asimétricamente, dejando los extremos de cada hebra de simple cadena complementarios entre sí.
¿En qué nos ayudan los fluoróforos?
Molécula que absorbe radiación emitiendo la energía absorbida en forma de luz. Proporciona una tinción de alta sensibilidad para la visualización de ADN en geles de acrilamida o agarosa.