Conceptos básicos Ag-Ac y marcadores
¿Por qué en las reacciones Ag-Ac primarias es necesario aplicar un sistema de revelado?
Porque no producen manifestación visible de la reacción, por lo que se necesita un marcador para evidenciar el complejo Ag-Ac
Tipo de ELISA más simple y rápido para detectar antígenos fijando directamente la muestra al soporte
ELISA directo
¿Qué emiten los fluorocromos después de ser excitados por una fuente energética?
Luz fluorescente de menor energía
¿Qué tipo de relación existe entre la cantidad de Ag en la muestra y la cantidad de Ag* libre tras la reacción?
Relación directa: más Ag → más Ag* libre
Nombra los 4 tipos principales de marcadores usados en los inmunoensayos
Enzimas, fluorocromos, isótopos radiactivos, nanopartículas coloreadas
¿En qué tipo de ELISA el Ag se sitúa en medio de dos anticuerpos?
ELISA sándwich
¿Qué equipo se utiliza para detectar la fluorescencia generada en FEIA?
Un fluorímetro
¿Cómo se realiza la separación en un RIA en fase líquida?
Precipitándose los inmunocomplejos Ag-Ac y Ag*-Ac
En un inmunoensayo competitivo, ¿cómo se relaciona la señal con la concentración del analito?
Es inversamente proporcional: cuanta más concentración del analito en la muestra, menos marcador se une
¿Qué tres enzimas son las más utilizadas en ELISA?
Fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano (HRP) y β-galactosidasa
Aplicado a la búsqueda de ANA en LES, indica cómo usamos la IFD y cómo la IFI
En una IFD buscamos Ac ANA unidos a tejidos en LES, mientras que en la IFI buscamos los ANA en el suero del paciente
¿Qué tipo de soporte utilizan las inmunocromatografías?
Una tira de nitrocelulosa
¿Qué diferencia fundamental existe entre un inmunoensayo heterogéneo y uno homogéneo?
En los heterogéneos hay fase sólida y se deben lavar los reactivos no unidos, mientras que en los homogéneos no hay fase sólida ni lavados
En EMIT, ¿qué ocurre con la enzima cuando el Ag* se une al anticuerpo?
La enzima queda inactiva por un cambio de conformación, impidiendo la reacción con el sustrato
¿Qué formato tienen la mayoría de los MEIA (Microparticle Enzyme ImmunoAssay)?
Formato sándwich no competitivo
En un test rápido, ¿qué indica la aparición de banda en la zona de control?
Que la prueba ha funcionado correctamente
¿Qué dos características deben cumplir las moléculas usadas como marcadores?
No alterar la formación del complejo Ag-Ac y ser fácilmente detectables
En un ELISA competitivo para detectar antígeno, ¿qué resultado se obtiene si se observa color tras adicionar el sustrato?
Indica poca cantidad de Ag en la muestra, ya que el Ag* marcado ocupó los anticuerpos
En ELFA, ¿qué tipo de señal se obtiene al final del ensayo?
Señal de fluorescencia, proporcional a la concentración del analito
En una inmunocromatografía para detectar Ag, ¿qué estructura se forma en la zona de detección?
Complejo Ac–Ag–Ac* (sándwich)