Procedimiento
¿Cómo y cuándo se desnaturaliza una proteína?
Es la primera etapa antes de cargas la muestra en el gel, implica mezclar una proteína con un buffer y calentarla
¿Para qué sirve el Western Blot?
Para identificar y cuantificar una proteína entre una mezcla compleja de proteínas
¿Para qué sirve el gel de poliacrilamida?
Crear una matriz porosa y aplicar un campo eléctrico
¿Cómo separa las proteínas?
Por tamaños con base en su masa molecular
No proporciona una cuantificación exacta y es menos eficaz para detectar isoformas
¿Qué es el bloque de la membrana?
Es un enjuague breve para evitar que los anticuerpos se peguen a sitios libres
¿Qué es el stacking gel?
Zona superior en dónde se apilan las muestras antes de separarlas
¿Qué es el Coomassie Brilliant Blue?
Tinte azul clásico que permite ver las bandas directamente en el gel
¿Cuál es el primer paso de la preparación de la muestra?
Lisis de la célula y tejido
Menciona los dos reactivos de los cuales se puede formar un gel en Western Blot
1. Nitrocelulosa
2. PVDF
¿Qué ocurre en la etapa de revelación o detección?
La señal aparece y se puede fotografiar las bandas
¿Qué significa SDS-PAGE?
Electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio.
¿Para qué sirve la leche descremada?
¿Con base en qué se selecciona un buffer?
En función de la localización de la célula de interés
¿Cuál es el fundamento de un Western Blot?
Alta especificidad de los anticuerpos al unirse a una secuencia de aminoácidos
¿Para qué sirve una escalera de masas moleculares?
Es una mezcla comercial de bandas conocidas que se cargan en el primer carril para estimar los tamaños
¿Qué es lo que detecta el Western Blot?
La unión antígeno anticuerpo de una proteína de interés
¿Para qué se utiliza el SDS?
1. Desnaturaliza las proteínas
2. Confiere carga negativa
Menciona las ventajas de la técnica
1. Alta resolución
2. Reproductibilidad
3. Alta sensibilidad
Menciona la principal ventaja del Western Blot
Permite detectar proteínas específicas desde que hay concentraciones muy bajas